תוֹכֶן

• צעדים
• שאלות ותשובות קהילתיות
• טיפים
• דברים שתצטרך

תרבית תאים היא הליך מורכב שרק עובדי מעבדה מקצועיים יכולים לבצע מכיוון שהוא דורש הרבה הכשרה וציוד מיוחד. התהליך כולל לקיחת דגימה קטנה של תאים מרקמת בעלי חיים ועידוד התאים להתרבות. שימוש בהליכים אספטיים, בחירת התרבות והמדיום האידיאליים ושמירה על התאים בסביבה ידידותית מסייעת להבטיח התפשטות טובה. אנשי מקצוע מתחילים בהגדרת אזור העבודה שלהם, ואז בוחרים את חומרי התרבות התאים הטובים ביותר לניסוי. לאחר מכן, חשוב לפקח על התאים שטופחו לאחרונה ולתת תרבויותיהם לפי הצורך להמשך התהליך.

צעדים

שיטה 1 מתוך 3: הכנת אזור העבודה שלך

1. 

   הקימו אזור עבודה אספטי ועיקרו את הציוד שלכם. ריססו את משטח העבודה שלכם ואת החלק הפנימי של מכסה המנוע לתרבית התאים עם תרסיס לחיטוי 70% אלכוהול. היפוכלוריטים, פנולים ואלכוהול משמשים בדרך כלל לעיקור ציוד במעבדה, אך בדוק אם יש מה זמין במעבדה שלך.
   • הסר פריטים זרים מאזור העבודה שלך כדי להפחית את העומס. אל תאחסן פריטים באותו חלל שבו אתה מבצע תרביות תאים.
   • הקפד להשאיר את מאוורר מכסה המנוע תרבית תאים. אל תכבה אותו אלא אם מכסה המנוע לא יהיה בשימוש במשך תקופה ארוכה.
   • פנה למפקח במעבדה אם יש לך שאלות לגבי השימוש בכדי לעקר את אזור העבודה שלך.

2. 

   
   
   שטפו ידיים ולבש ציוד מגן אישי. השתמש בסבון אנטיבקטריאלי ובמים חמים כדי לשטוף את הידיים. ואז לבש כפפות, חלוק, משקפי מגן, מסכה וכל דבר אחר שדורש ציוד מגן אישי לצורך הניסוי שלך.
   • דאג לקשור את שיערך בחזרה אם הוא ארוך כך שהוא לא יהיה בדרכים.

3. 

   
   
   לעקר כל ריאגנטים, פתרונות או אמצעי מדיה אחר בו תשתמש. זה עשוי להיות כרוך בשימוש בחיטוי או במסנן סטרילי. בדוק את ההנחיות לגבי סוג המדיה בה אתה משתמש לפני שאתה מנסה לעקר אותה.
   • סגור את הבקבוק מיד לאחר עיקור המדיום כדי למנוע זיהום.

4. 

   
   
   בצע את הליכי הטיפול הסטריליים כדי למנוע זיהום. זיהום המדיום התא שלך עם חומרים כימיים או ביולוגיים עלול להרוס את הניסוי. מזהמים כימיים כוללים חומרי ניקוי, מים, אנדוטוקסינים ומזהמים בתקשורת לתרבית התאים. המזהמים הביולוגיים כוללים עובשים, שמרים, חיידקים, נגיפים ומיקופלזמה. כדי לשמור על מזהמים אלה ממדיום תרבית התאים שלך, עקוב תמיד אחר טכניקה אספטית.
   • לדוגמא, עדיף להשתמש בפיפטה להעברת מדיום לבקבוק, שכן שפיכת המדיום מגדילה את הסיכון לזיהום.

   עֵצָה: עבוד תמיד לאט ובכוונה בכדי להבטיח שאתה שומר על מרחב עבודה סטרילי.

שיטה 2 מתוך 3: בחירת תאים, תרבות ומדיום

1. 

   בחר את שורת התאים המתאימה לניסויים שלך. אתה יכול לרכוש מגוון רחב של שורות תאי בעלי חיים מספקים מסחריים או מלכ"ר. בדוק כדי לראות אילו סוגי תאים זמינים ובחר את המתאים ביותר לניסוי שלך. הקפד לבחור שורת תאים איכותית כדי להגדיל את הסיכויים לניסוי מוצלח. כמה קריטריונים שתרצה לקחת בחשבון כוללים:
   • זן התא
   • מאפיינים פונקציונליים של התאים
   • בין אם אתה זקוק לשורות תאים סופיות או רציפות
   • תנאי הצמיחה והמאפיינים האידיאליים
   • בין אם אתה זקוק לתאים רגילים או טרנספורמציים

   אַזהָרָה: לעולם אל תנסה לתרבית תאים שנלקחו ממישהו העובד במעבדה. החדרת תאים אלה בטעות לגופו של האדם עלולה לגרום למחלה ממאירה.

2. 

   עבור עם תרבות צמודה לרוב סוגי התאים. תרבית חסידה היא מצע מלאכותי עליו מרובדים התאים. סוג זה של תרבות פועל בצורה הטובה ביותר עבור רוב התאים של בעלי החיים שכן הם דורשים מצע לנוח על התפשטות. עם זאת, עדיף לבדוק את המפרט עבור קו הסלולר שבו אתה משתמש כדי לקבוע אם אתה זקוק לתרבות מסוג זה.
   • לאחר הוספת המדיום שלך לתאים בתרבית חסידה, הסתכל בתאים במיקרוסקופ כדי לראות אם הם השתחררו מהמצע. הם יתפשטו אם הם השתחררו מהמצע.

3. 

   בחר תרבית השעיה לתאים שהותאמו לה. עם השעיה, התאים לא נשענים על שום דבר. במקום זאת, הם צפים חופשי בנוזל, מה שיכול להקל על הגדלת התרבות בתוספת מדיום. כמה שורות תאים שונו במיוחד כדי להשתמש בהשעיה, לכן יש לוודא עם יצרן שורות התאים. מדיום השעיה הוא גם אפשרות טובה לתאים שאינם דביקים.
   • זכור כי תצטרך לבצע ספירת תאים יומית אם אתה משתמש בתרבית תאי השעיה.

4. 

   בחר במדיום התרבות המתאים ביותר לתאים שלך. מדיום התרבות האידיאלי ישתנה בהתאם לסוג התאים שבו אתה משתמש. פנה ליצרן קווי התא כדי לקבוע את המדיום האידיאלי לתרבית תאים עבור התאים שאתה משתמש בהם. כמה סוגים נפוצים כוללים:
   • נַסיוֹב
   • תקשורת בזאלית
   • מדיה מופחתת בסרום
   • מדיה ללא סרום

שיטה 3 מתוך 3: ניטור התאים

1. 

   בדוק את רמות ה- pH וה- CO2 של מדיום התא. רמות ה- CO2 הבינוניות נשמרות בצורה הטובה ביותר בין 4-10% לכל שורות התאים. עם זאת, רמת ה- pH האידיאלית של המדיום תשתנה בהתאם לסוג התאים שבהם אתה משתמש, לכן בדוק תמיד את רמת ה- pH של תרבית התאים שלך. פנה ליצרן קו התאים לקבלת פרטים על רמת ה- pH האידיאלית, או השתמש ברמות ה- pH המומלצות עבור סוגי התאים שבהם אתה משתמש.
   • לדוגמא, תאי יונקים גדלים בצורה הטובה ביותר עם pH של 7.4, אך תאי חרקים גדלים בצורה הטובה ביותר עם pH של 6.2.

2. 

   לווסת את הטמפרטורה להשגת הסביבה האופטימלית. תאים מסוימים ישגשגו רק בטמפרטורה צרה, ואילו תאים אחרים עשויים לשגשג בטווח רחב יותר של טמפרטורות. שקול את סוג התאים שאתה משתמש בו והתאם את טמפרטורת הסביבה בה אתה שומר על התאים לרמה האידיאלית. כמה המלצות טמפרטורה נפוצות כוללות:
   • תאים אנושיים ויונקים - 36 עד 37 מעלות צלזיוס (97 עד 99 מעלות צלזיוס)
   • תאי חרקים - 27 מעלות צלזיוס (81 מעלות צלזיוס)
   • תאי עופות - 38.5 מעלות צלזיוס (101.3 מעלות צלזיוס)
   • תאים בדם קר - 15 עד 26 מעלות צלזיוס (59 עד 79 מעלות צלזיוס)

3. 

   ספר את התאים באמצעות המוציטומטר מיד לאחר שתתחיל תרבית. המוציטומטר הוא עדשה דמוית רשת שעוברת מעל התאים תחת מיקרוסקופ. זה מאפשר לך לספור את התאים ביתר קלות על ידי שבירת התאים לרבעים ולמקטעים קטנים אחרים.
   • הקפד לתעד את מספר התאים בכל רשת על המוציטומטר, כך שתוכל לקבוע אם התאים מתרבים בפעם הבאה שתספור אותם.

   עֵצָה: השתמש בלחיצה כדי להקל על מעקב אחר מספר התאים בתרבית.

4. 

   תת תרבות התאים ברגע שהם הוכפלו. לאחר שהתאים במדיום הוכפלו במספרם, ניתן לתרבית אותם כדי להמשיך בצמיחתם על ידי חלוקת התאים לשני מיכלים והוספת מדיום טרי לכל אחד מהם. השתמש באותו סוג של מצע או מדיום השעיה בו השתמשת לתרבית התאים הראשונית.
   • חלק את התאים לשני צלוחיות כך שחצי בכל אחד מהם, ואז הוסף 3 חלקים מדיום חדש למיכל כך שהמדיום יהיה 25% חדש ו 75% חדש.

שאלות ותשובות קהילתיות

טיפים

דברים שתצטרך

• סַבּוֹן
• כפפות
• שִׂמלָה
• מסכה
• מכסה המנוע לתרבית תאים
• חומר ניקוי חיטוי
• תרבית תאים
• מדיום לתרבית תאים
• קו טלפון
• פיפטות
• מִיקרוֹסקוֹפּ
• המוציטומטר
• קליק (לספירת תאים)